Après avoir examiné le gonflement vulvaire et pincé la commissure vulvaire vers le bas, l'écouvillon est introduit verticalement le long de la paroi caudale du vagin de façon à éviter de buter dans la fosse clitoridienne. Une fois le plafond du vagin atteint, l'écouvillon est pivoté en position horizontale et enfoncé le plus loin possible sans forcer. Par des mouvements circulaires, les sécrétions et les cellules exfoliées sont alors récoltées autour du col de l'utérus.
L'aspect de l'écouvillon est habituellement rouge en début de chaleurs, rosé à incolore en fin de pro-oestrus, purulent en cas d'infection vaginale ou utérine.
L'extrémité de l'écouvillon est roulée délicatement sur une lame préalablement dégraissée sans repasser deux fois sur le même trajet pour éviter de créer des amas de cellules.
Le prélèvement est alors fixé à l'aide d'un cytofixateur pour le porter chez le vétérinaire ou coloré en vue d'un examen immédiat.